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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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ZRELISA試劑盒的關(guān)鍵組分有哪些
2026-4-14 閱讀(12)
ZRELISA試劑盒核心組分及功能
根據(jù)雙抗體夾心法的實(shí)驗(yàn)原理，試劑盒組分可分為固相載體、抗體試劑、信號(hào)系統(tǒng)、輔助試劑四大類：
固相載體類
酶聯(lián)板（Assay Plate）：96孔/48孔聚苯乙烯板，表面已包被抗ZR單克隆抗體，用于特異性捕獲樣本中的ZR抗原
注意事項(xiàng)：未用完的板條需裝入密封袋，2-8℃保存，避免板條干燥導(dǎo)致抗體活性下降
抗體與抗原試劑
標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶?jī)龈善罚瑸楦呒兌扔衩姿睾塑?，?fù)溶后濃度為100ng/ml，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本中ZR濃度
標(biāo)記抗體：120μl/瓶，為抗ZR多克隆抗體，與偶聯(lián)，用于識(shí)別并結(jié)合已被捕獲的ZR抗原
HRP標(biāo)記親和素：120μl/瓶，辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和蛋白，可特異性結(jié)合，形成完整的抗原-抗體-酶復(fù)合物
注意事項(xiàng)：標(biāo)記抗體和HRP標(biāo)記親和素需臨用前用對(duì)應(yīng)稀釋液1:100稀釋，稀釋后僅可使用1次
信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)
底物溶液（TMB Substrate）：10ml/瓶，為四甲基聯(lián)苯胺溶液，在HRP酶催化下發(fā)生顯色反應(yīng)，顏色深淺與ZR濃度正相關(guān)
終止液（Stop Solution）：10ml/瓶，為2N硫酸溶液，用于終止酶促顯色反應(yīng)，使溶液由藍(lán)色變?yōu)辄S色
注意事項(xiàng)：底物溶液需避光保存，顯色反應(yīng)需在37℃避光條件下進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間控制在15分鐘內(nèi)
輔助試劑
樣品稀釋液（Sample Diluent）：20ml/瓶，用于稀釋樣本（如血清、組織勻漿），減少基質(zhì)干擾
抗體稀釋液：10ml/瓶，用于稀釋標(biāo)記抗體，維持抗體活性
HRP親和素稀釋液：10ml/瓶，用于稀釋HRP標(biāo)記親和素，保證酶活性
濃洗滌液（Wash Buffer）：20ml/瓶，為25倍濃縮液，使用前用蒸餾水稀釋，用于洗去未結(jié)合的抗體和雜質(zhì)
注意事項(xiàng)：濃洗滌液若有結(jié)晶析出，可在40℃水浴中加溫助溶，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果
實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵操作要點(diǎn)
樣本處理規(guī)范
植物樣本：取1g組織加入9ml PBS（0.1M，pH7.4）充分勻漿，3000rpm離心15分鐘，取上清液檢測(cè)
血清樣本：室溫靜置2小時(shí)后離心分離，避免溶血或脂血樣本影響酶活性
樣本避免含NaN3，因其會(huì)抑制HRP酶活性
溫育與洗板注意事項(xiàng)
所有溫育步驟需在37℃條件下進(jìn)行，避免溫度波動(dòng)導(dǎo)致非特異性結(jié)合
洗板需重復(fù)4次，每次靜置1分鐘后甩去洗滌液，用吸水紙輕輕拍干，避免交叉污染
結(jié)果計(jì)算說(shuō)明
樣本需稀釋5倍后檢測(cè)（10μL樣本+40μL稀釋液），最終結(jié)果需乘以稀釋倍數(shù)
標(biāo)準(zhǔn)曲線需做復(fù)孔，計(jì)算平均值后繪制，相關(guān)系數(shù)R值需≥0.99
